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微生物实验操作注意事项

微生物实验操作注意事项

  • 分类:技术交流
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2019-07-17 15:10
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【概要描述】微生物实验操作注意事项一、器皿的清洗与灭菌1、灭菌前准备   所有需要灭菌的物品首先应用纯水清洗并晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。2、装放(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。(2)大型高压蒸气锅::放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。(3)堆放

微生物实验操作注意事项

【概要描述】微生物实验操作注意事项一、器皿的清洗与灭菌1、灭菌前准备   所有需要灭菌的物品首先应用纯水清洗并晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。2、装放(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。(2)大型高压蒸气锅::放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。(3)堆放

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微生物实验操作注意事项

一、器皿的清洗与灭菌

1、灭菌前准备
    所有需要灭菌的物品首先应用纯水清洗并晾干,玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如用金属筒应将上面通气孔打开。装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包好。
2
、装放
(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。
(2)大型高压蒸气锅::放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能过挤。

(3)堆放灭菌物体时,严禁堵塞安全阀和放气阀的出气孔,必须留出空位保证其空气畅通,以免造成事故。

(4)灭菌液体时,应将液体装在硬质的耐热玻璃瓶中,体积不超过3/4,瓶口用棉花沙塞,勿使用没打孔的橡胶或软木塞。

(5)对于不同类型灭菌物,切勿一块灭菌。

(6)物品取出,随即检查包装的完整性,若有破坏或棉塞脱掉,不可作为无菌物品使用。   

(7)取出的合格灭菌物品,应存放于贮藏室或防尘柜内,严禁与未灭菌物品混放。

(8)取出的物品,如为包装有明显的水浸者或取出的物品掉落在地或误放不洁这处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用。

(9)培养基或试剂等,应检查是否符合达到灭菌后的色泽或状态,未达到者应废弃。

(10)启闭式容器,在取出时应将筛孔关闭。

二、培养基制备

1、根据培养基配方的成分按量称取,然后溶于蒸馏水中,在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。
2
、PH测定及调节:PH测定要在培养基冷至室温时进行,因在热或冷的情况下,其PH有一定差异,当测定好时,按计算量加入碱或酸混匀后,应再测试一次。培养基PH值一定要准确,否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高,故不宜灭菌压力过高或次数太多,以免影响培养基的质量,指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加入。
3、培养基需保持澄清,便于观察细菌的生长情况,培养基加热煮沸后,可用脱脂棉花或绒布过滤,以除去沉淀物,必要时可用鸡蛋白澄清处理,所用琼脂条要预先洗净晾干后使用,避免因琼脂含杂质而影响透明度。
4、盛装培养基不宜用铁、铜等容器,使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。
5、培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的,又要注意不因加热而降低其营养价值,一般121℃15min即可,如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等,则应采用低温灭菌或间歇法灭菌,一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等,待基础琼脂高压灭菌后凉至50℃左右再加入。
6、每批培养基制备好后,应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基,使用标准菌株接种培养,观察生化反应结果,应呈正常反应,培养基不应贮存过久,必要时可置4℃冰箱存放。
7、每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录,以备查询。

三、无菌操作要求 
1.
接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。      
2.进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间,工作前经紫外线消毒后使用。       
3.接种样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球将手擦干净。      
4.进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。        
5.从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。       
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。       
7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针与杆的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min,再经火焰烧灼。
8.吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取。

9.菌间使用前后应将门关紧, 打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需30W紫外灯,距离在1.0m处,照射时间不少于30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响。      

10.处理和接种样品时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。       

四、培养后灭菌

 

微生物实验所用实验器材、培养物等未经消毒处理,一律不得带出实验室。
1
、经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内,并集中存放在指定地点,待统一进行高压灭菌。
2、经微生物污染的培养物,必须经121℃30min高压灭菌。
3、染菌后的吸管,使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中,最少浸泡24h(消毒液体不得低于浸泡的高度)再经121℃30 min高压灭菌。
4、涂片染色冲洗片的液体,一般可直接冲入下水道,烈性菌的冲洗液必须冲在烧杯中,经高压灭菌后方可倒入下水道,染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后,煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿,必须高压灭菌后洗涤。
5、打碎的培养物,立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位,浸泡半小时后再擦拭干净。
6.污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等,应放入专用消毒袋内,经高压灭菌后方能洗涤。

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